Elektroforesis SDS-PAGE, Immunoblotting, dan Penentuan Asam Amino Antigen dari Sarung Tangan Lateks Karet Alam

Abstract

Lateks karet alam yang digunakan sebagai bahan baku barang jadi lateks alam diketahui dapat menimbulkan reaksi alergi bagi penggunanya. Penelitian ini bertujuan menentukan jenis protein antigen dan asam amino penyusun dari sarung tangan lateks karet alam.Protein sampel hasil ekstraksi dengan bufer fosfat salin diuji dengan metode Lowry. Hasilnya menunjukkan bahwa kandungan protein total sarung tangan lateks alam berprotein rendah lebih kecil 78.8% daripada sarung tangan komersial. Protein kemudian dipisahkan menggunakan metode elektroforesis gel poliakrilamida-natrium dodesil sulfat (SDS-PAGE). Gel yang tidak diwarnai diuji dengan metode western blotting untuk mendeteksi keberadaan protein antigen. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa terdapat pita protein antigen yang identik, yaitu protein pada 43 kDa dan berdasarkan data WHO/IUIS, diketahui bahwa protein tersebut merupakan protein alergen jenis Hev b7.02.Hasil analisis kromatografi cair kinerja tinggi menunjukkan bahwa protein antigen pada 43 kDa mengandung 7 asam amino, yaitu asam aspartat, arginin, histidin, valin, norvalin, isoleusin, dan leusin, sedangkan protein nonantigen pada 30 kDa mengandung 5 asam amino, yaitu histidin, arginin, valin, isoleusin, dan leusin. Dua asam amino yang membedakan antara protein antigen dan protein nonantigen adalah asam aspartat dan norvalin.