Isolasi Dan Uji Genotoksisitas Inhibitor Topoisomerase I Daun Lipomoea pes-caprea

Abstract

Enzim DNA topoisomerase merupakan enzim nuclear essensial yang mengatur replikasi DNA di dalam sel. Enzim topoisomerase ditemukan dalam kelimpahan yang sangat tinggi pada sel kanker dibandingkan sel sehat/normal sehingga inhibitor topoisomerase menjadi salah satu target penemuan antikanker. Tesis ini melaporkan senyawa bioaktif dari Ipomoea pes-caprae yang dapat menghambat kerja dari enzim topoisomerase I, uji genotoksisitas dari ekstrak terpilih (kloroform) dan menentukan golongan senyawa dari ekstrak aktif. Sampel daun I. pes-caprae berasal dari kepulauan seribu (pulau Pari). Penelitian dimulai dengan proses ekstraksi daun kering menggunakan pelarut organik, yaitu heksana, kloroform, etil asetat, aseton dan metanol. Kemudian ekstrak yang didapat diuji fitokimia dan aktivitas inhibitor topoisomerase I dengan Topoisomerase I Drug Screening Kit dari TopoGen. Ekstrak terpilih diuji genotoksisitas. Ekstrak terpilih dipisahkan dengan KLT (kromatografi lapis tipis) dan kromatografi kolom. Kemudian fraksi terpilih di identifikasi dengan GCMS (gas kromatografi spektrometri massa). Rendemen ekstrak yang didapat dari kelima pelarut tersebut adalah heksana 0.42%, kloroform 0.675%, etil asetat 0.33%, aseton 0.66%, dan metanol 2.896%. Uji fitokimia ekstrak kasar daun I. pes-caprae menunjukkan adanya kandungan senyawa golongan alkaloid, flavonoid, dan tanin. Kelima ekstrak tersebut memiliki aktivitas inhibitor enzim topoisomerase I pada konsentrasi 50 μg/ml dengan kontrol positif kamptotekin pada konsentrasi 100 μM (34.84 μg/ml). Uji genotoksisitas ekstrak kloroform menunjukkan bahwa tidak genotoksik. Hasil kromatografi lapis tipis menunjukkan ekstrak kloroform terpisah menjadi 6 fraksi, namun pada proses kromatografi kolom didapat dua fraksi yang terpisahkan (F1 dan F8). Fraksi F1 terpilih untuk diidentifikasi karena memiliki rendemen tertinggi. Hasil dugaan analisis GCMS terhadap F1 menunjukkan kemiripan dengan senyawa dietilheksil ester benzendikarboksilat.