Amiloidosis pada Kuda Hiperimun Penghasil Antisera: Kajian Klinis, Patologis, dan Patologi Klinik

Abstract

Hiperimunisasi yang diberikan secara terus menerus pada kuda dalam proses produksi antisera menyebabkan penurunan kualitas kesehatan kuda. Kejadian amiloidosis merupakan efek yang paling sering ditemukan. Amiloidosis merupakan kelompok penyakit akibat protein yang mengalami kesalahan pelipatan dan membentuk timbunan fibril amiloid pada jaringan ekstraseluler. Akumulasi fibril amiloid tidak dapat didegradasi oleh enzim proteolitik, bersifat sitotoksik, menginduksi apoptosis, dan mengganggu fungsi organ hingga menyebabkan kerusakan organ secara permanen. Saat ini belum diketahui metode diagnosis noninvasif yang dapat diandalkan dalam diagnosis amiloidosis. Perpaduan antara pemeriksaan histopatologi, patologi klinik, dan gejala klinis yang muncul pada kuda penghasil antisera perlu dilakukan untuk mengetahui sejauh mana sebaran amiloid dalam tubuh kuda dan seberapa parah kerusakan organ yang ditimbulkan. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis temuan klinis yang muncul pada kuda penghasil antisera, menganalisis timbunan amiloid dan kerusakan organ secara patologi anatomis maupun histopatologis, dan menganalisis berbagai perubahan patologi klinik yang terjadi pada kuda penghasil antisera. Hewan penelitian merupakan kuda hibah dari PT. Bio Farma (Persero) Bandung sebanyak 12 ekor yang terdiri atas 3 ekor kuda sehat (belum pernah digunakan sebagai penghasil antisera), dan 9 ekor kuda produksi antisera yang telah diistirahatkan dari proses produksi antisera. Kuda penelitian dibagi menjadi 4 kelompok berdasarkan lamanya waktu aktif kuda sebagai hewan penghasil antisera. Kelompok I merupakan kuda-kuda dengan masa aktif produksi antisera selama 2-3 tahun, kelompok II dengan masa aktif produksi 4-5 tahun, kelompok III dengan masa aktif produksi 6-7 tahun, dan kelompok kontrol merupakan kuda-kuda sehat yang belum pernah digunakan sebagai penghasil antisera. Pemeriksaan fisik yang dilakukan terdiri atas pengukuran body condition score (BCS), inspeksi, pemeriksaan umum, dan pemeriksaan ultrasonografi. Pemeriksaan patologi klinik terdiri atas pemeriksaan hematologi rutin, pemeriksaan biokimia darah, indeks besi, serum amiloid A (SAA), sumsum tulang, analisis urin, dan cairan peritoneum. Sebanyak 9 kuda dieutanasia untuk pemeriksaan patologi anatomi dan histopatologi dengan pewarnaan hematoksilin eosin (HE) dan Congo red. Hasil pemeriksaan klinis menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan nyata pada parameter BCS, denyut jantung, temperatur, maupun frekuensi napas (P>0,05) antar kelompok. Abnormalitas fisik yang ditemukan berupa adanya massa di daerah leher dan uveitis bilateral yang berkaitan dengan proses hiperimunisasi, sedangkan abnormalitas organ reproduksi serta ekstremitas gerak yang ditemukan tidak berhubungan langsung dengan proses hiperimunisasi. Pemeriksaan ultrasonografi transcutaneous menggunakan probe konveks frekuensi 3,5-5 MHz pada hepar dapat digunakan dalam membantu diagnosis amiloidosis dengan melihat secara detail perubahan yang terjadi. Pemeriksaan patologi anatomi menunjukkan adanya uveitis bilateral, hepatomegali, nodul hepatik, dan massa pada testis dan ginjal. Berdasarkan pemeriksaan histopatologi dengan pewarnaan Congo red ditemukan fibril amiloid di sekitar hepatosit hepar, tubuli ginjal, dan pada uvea mata. Amiloid terdeteksi berwarna merah salmon apabila diamati dengan mikroskop cahaya dan menunjukkan warna merah berpendar pada pengamatan mikroskop fluoresens. Kuda hiperimun penghasil antisera memiliki kadar total protein plasma, globulin, dan fibrinogen di atas batas atas kisaran normal, namun nilai albumin, aspartate aminotransferase, gamma glutamyl transferase, total bilirubin, kreatin kinase, blood urea nitrogen, dan kreatinin berada pada kisaran normal. Kadar SAA dalam darah kuda tersebut berada pada kisaran normal meskipun timbunan amiloid positif ditemukan pada organ hepar, ginjal, dan mata. Selain itu perlakuan hiperimunisasi menyebabkan anemia yang ditandai dengan penurunan jumlah eritrosit yang signifikan (P<0,05), meskipun nilai Hb, PCV, trombosit dan persentase retikulosit tidak mengalami perubahan yang signifikan (P>0,05). Lamanya waktu paparan imunogen berpengaruh terhadap rasio mieloid:eritroid sumsum tulang (P<0,05), namun tidak berpengaruh terhadap indeks besi (besi serum, UIBC, TIBC, dan saturasi transferrin) (P>0,05). Hal tersebut menunjukkan bahwa perlakuan hiperimunisasi pada kuda menyebabkan anemia non-regeneratif dengan jalur supresi eritropoiesis sumsum tulang dan tidak memengaruhi profil besi. Pemeriksaan secara komprehensif terhadap kuda hiperimun penghasil antisera yang terdiri dari pemeriksaan klinis, patologis, dan patologi klinik terbukti dapat digunakan sebagai metode untuk menilai berbagai penurunan kondisi kesehatan yang berkaitan dengan amiloidosis dan efek samping hiperimunisasi yang lain.

Prolonged hyperimmunization during the production of horse antisera leads to deterioration of horse health quality. Amyloidosis is the most common side effect found in antisera-producing horses. Amyloidosis is a group of diseases caused by protein misfolding that forms deposits of amyloid fibrils in the extracellular tissues. Amyloid fibrils accumulation cannot be degraded by proteolytic enzymes, are cytotoxic, induce apoptosis, disrupt organ function, and ultimately causing permanent organ damage. At the moment, there is no reliable non-invasive diagnostic method for the diagnosis of amyloidosis. Combining histopathological examination, clinical pathology, and clinical symptoms in antisera-producing horses is essential to determine the extent of amyloid distribution in the horse's body and the severity of organ damage. This study was conducted to analyze amyloid deposits and organ damage macroscopically and microscopically, measure and analyze various changes in clinical pathology, and analyze the clinical findings that appear in antisera-producing horses. The study was conducted from December 2022 to March 2023. The 12 horses used in the study came from PT. Bio Farma (Persero) Bandung, which consisted of 3 healthy horses (never used as antisera producers), and 9 antisera-producing horses that had been rested from the antisera production process. The horses were divided into 4 groups based on the length of time they have been actively producing antisera. Group I was horses with an active antisera production period of 2-3 years, group II with an active production period of 4-5 years, group III with an active production period of 6-7 years, and the control group was healthy horses that had never been used as antisera producers. The physical examination consisted of body condition score (BCS) measurement, inspection, general examination, and ultrasound examination. The clinical pathology examination consisted of routine hematology, blood biochemistry, iron index, serum amyloid A (SAA), bone marrow, urine and peritoneal fluid analysis. A total of 9 horses were euthanized for organ examination and histopathology with hematoxylin eosin (HE) and Congo red staining. Clinical examination results showed that there were no significant differences in body condition score (BCS) parameters, heart rate, temperature, or respiratory frequency (P>0.05). The physical abnormalities found in the form of cervical mass at the immunogen injection area and bilateral uveitis were related to the hyperimmunization process, while the abnormalities found in reproductive organs and limbs were not directly related to the hyperimmunization process. Transcutaneous ultrasound examination using a 3.5-5 MHz frequency convex probe of the liver can be used in assisting the diagnosis of amyloidosis by looking in detail at the changes that are present. Postmortem examination showed bilateral uveitis, hepatomegaly, hepatic nodules and renal mass. Based on histopathological examination with Congo red staining, amyloid fibrils were found around the hepatocytes, renal tubules, and in the uvea of both eyes. Amyloid fibrils were detected to be salmon red when observed by light microscopy and showed a bright red color under fluorescence microscopy observation. Antisera-producing hyperimmune horses had levels of total plasma protein, globulin, and fibrinogen above normal limits, despite the albumin, aspartate aminotransferase, gamma glutamyl transferase, total bilirubin, creatine kinase, blood urea nitrogen, and creatinine levels were in the normal range. Serum amyloid A (SAA) levels were at normal concentrations despite positive amyloid deposits detected in the liver, kidneys and eyes. Hyperimmunization treatment caused anemia characterized by a significant decrease in erythrocyte count (P<0.05), although Hb, PCV, platelet and reticulocyte percentages did not change significantly (P>0.05). The duration of immunogen exposure affected the bone marrow myeloid: erythroid ratio (P<0.05), but had no effect on iron indices (serum iron, UIBC, TIBC, and transferrin saturation) (P>0.05). This suggests that hyperimmunization treatment in horses causes nonregenerative anemia by suppressing bone marrow erythropoiesis and does not affect the iron profile. A comprehensive examination of antisera-producing hyperimmune horses involving clinical, pathological and clinical pathology aspects can be used to evaluate various health impairments associated with amyloidosis and other side effects of hyperimmunization.