Konstruksi Vektor Ekspresi Gen KEX2-650 dengan Metode Subkloning

Abstract

KEX2 (EC3.4.21.61) dari Saccharomyces cerevisiae adalah enzim protease yang memproses pematangan pro-protein secara intraselular di dalam retikulum endoplasma (RE) dan kompartemen akhir badan Golgi. KEX2 memiliki domain transmembran yang menyebabkan enzim ini tertahan di dalam membran RE dan tidak dapat diekspreksikan secara ekstraselular seutuhnya. Penelitian ini bertujuan untuk konstruksi gen Kex2-650 tanpa domain transmembran dengan metode subkloning. Gen Kex2-650 diamplifikasi dengan metode PCR dari plasmid pD902-KEX2-699 dan disubklon ke dalam pPICZa. Metode yang digunakan meliputi konstruksi gen rekombinan KEX2-650 dengan PCR untuk amplifikasi sekuen gen dan menambahkan situs restriksi XhoI pada kedua ujungnya, restriksi gen dan plasmid dengan XhoI, ligasi fragmen gen ke plasmid pPICZa, transformasi plasmid rekombinan ke E. coli DH5a, isolasi plasmid, dan verifikasi sisipan dengan PCR. Amplifikasi gen KEX2-650 berhasil dilakukan, ditunjukkan oleh terbentuknya amplikon berukuran 1.6 kb. Plasmid rekombinan pPICZa-KEX2-650 berhasil ditransformasikan ke sel E. coli yang ditunjukkan oleh terdeteksinya amplikon berukuran 2.2 kb.