Penapisan Enzim Mikroba Transglutaminase (MTGase) dari Isolat Actinomycetes Selat Makassar

Abstract

Enzim transglutaminase (TGase) merupakan enzim transferase dengan nama sistematik protein-glutamin-?-glutamiltransferase. Enzim TGase telah dilaporakan diproduksi oleh mikrob dan disebut Microbial Transglutaminase (MTGase). Actinomycetes merupakan mikrob penghasil senyawa aktif dalam jumlah yang sangat besar. Salah satu senyawa aktif yang dihasilkan Actinomycetes adalah enzim MTGase. Penelitian ini bertujuan menyeleksi Actinomycetes laut penghasil transglutaminase secara kualitatif serta memastikan keberadaan gen melalui amplifikasi dengan PCR. Metode penelitian meliputi seleksi isolat Actinomycetes menggunakan Filter Paper Disc, isolasi DNA, kuantifikasi DNA dan amplifikasi menggunakan PCR. Hasil penelitian menunjukkan 7 dari 46 isolat positif memiliki aktivitas transglutaminase dengan konsentrasi DNA tertinggi sebesar 125,45 ng/µl. Nilai kemurnian yang dibaca pada rasio A260/280 berada pada kisaran 1,83 – 1,92 dengan nilai rata-rata 1,88. Amplifikasi gen menggunakan primer PTgase-4 dan PTgase-5 menghasilkan pita berukuran 400 bp. Isolat Actinomycetes menunjukkan adanya aktivitas transglutaminase dan pemeriksaan amplifikasi diperoleh pita penyandi transgulaminase.

Transglutaminase enzyme (TGase) is a transferase enzyme with the systematic name protein-glutamine-?-glutamyltransferase. TGase enzymes could be produced by microbes and it called Microbial Transglutaminase (MTGase). Actinomycetes is a microbe that produces a very large number of active compounds. One of the active compounds produced by Actinomycetes is the MTGase enzyme. This study aimed to qualitatively select marine Actinomycetes producing transglutaminase and ensure the presence of genes through amplification by PCR. The research method included selection of Actinomycetes isolates using Paper Disc Filter, DNA extraction, DNA quantification and amplification using PCR. The results showed that 7 out of 46 positive isolates had transglutaminase activity with the highest DNA concentration of 125.45 ng/µl. Purity values read on the A260/280 ratio were in the range of 1.83 - 1.92 with an average value of 1.88. Gene amplification using PTgase-4 and PTgase-5 primers produced a 400 bp band. Actinomycetes isolates showed transglutaminase activity and amplification examination obtained transgulaminase encoding band.