Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Gen Virulen Streptococcus agalactiae sebagai Kandidat Vaksin DNA

Abstract

Salah satu masalah utama dalam budidaya ikan nila (Oreochromis niloticus) di Indonesia adalah penyakit akibat bakteri Streptococcus agalactiae. Vaksinasi merupakan cara yang paling efektif untuk mencegah dan melindungi penyakit tersebut. Vaksin DNA merupakan teknologi vaksin generasi ketiga berdasarkan antigen yang digunakan. Gen mga adalah DNA-binding protein yang mengaktivasi beberapa gen virulen untuk mengkode protein M, C5a peptidase dan protein Mga. Penelitian ini bertujuan untuk isolasi, identifikasi dan karakterisasi gen mga untuk mendukung pengembangan vaksin DNA. Isolat berbentuk coccus, Gram positif berhasil diisolasi dan diekstraksi dari ikan nila sakit. Berdasarkan gen penyandi 16S rRNA teridentifikasi sebagai bakteri S. agalactiae dengan kesamaan 97% (no. Aksesi GenBank EU075070.1). Gen mga S. agalactiae berhasil diisolasi dengan ukuran 1454 bp. Kloning gen ke vektor pGEM-T easy dan transformasi menggunakan sel kompeten Eschericia coli DH5α dengan metode heat shock berhasil dilakukan dan hasil sekuensing gen tersebut sesuai dengan sekuen gen target. Vektor pGEM-T easy dengan sisipan gen mga berhasil direstriksi menggunakan metode double digestion enzim Sal I dan Not I. Fragmen DNA telah berhasil dikloning ke vektor pMBA yang memiliki promoter β-actin ikan medaka sebagai pMBA-MGA. Analisis sekuen nukleotida berdasarkan primer M13 menunjukkan bahwa klon mengandung gen mga dengan 98% kesamaan terhadap M protein mga S. agalactiae (no. Aksesi GenBank CP003919.1). Peta plasmid telah berhasil digambar menggunakan program Snapgene 1.1.3. Konstruksi gen mga yang dikendalikan oleh promoter β-actin ikan medaka telah berhasil dibuat dan ini merupakan kandidat vaksin DNA untuk mengendalikan infeksi S. agalactiae pada ikan nila