Produksi Enzim Rekombinan N-asetil Neuraminat Liase dari Lactobacil/us plantarum dalam Skala Bioreaktor

Abstract

N-acetylneuraminic acid lyase (NANA liase) merupakan enzim yang mengkatalis reaksi pemecahan NANA (N-Acetylneuraminic Acid) menjadi N-asetil D manosamin dan asam piruvat. Fungsi ini menjadikan NANA liase berperan penting dalam metabolisme NANA dalam tubuh. NANA merupakan sakarida yang terdapat dalam tubuh mamalia dan bakteri. Peningkatan kadar NANA dalam tubuh mengindikasikan adanya sel kanker sehingga NANA liase dapat dijadikan sebagai pendeteksi NANA dalam tubuh. Penelitian ini, bertujuan untuk memproduksi NANA liase dalam skala bioreaktor dan pemumian enzim dilakukan dengan metode kromatografi cair, yaitu kromatogra:fi penukar ion dengan matrik DEAE Sepharose dan kromatogra:fi interaksi hidrofobik dengan matrik Phenyl Sepharose. Produksi kultivasi E. coli rekombinan yang menghasilkan enzim NANA liase dari L. p/antarum menggunakan fermentor dengan media 7 I dilakukan 2 kali. Produksi pertama menghasilkan 30 gram pelet berat basah, sedangkan produksi kedua menghasilkan 55 gram pelet beraJ basah. Pemurnian dengan kromatografi cair menghasilkan pita tebal yang diduga merupakan enzim nana liase. Pengecekan dengan SDS PAGE pada kolom Phenyl Sepharose, enzim NANA liase mempunyai ukuran sekitar 32 kDa muncul pada perlakuan dengan amonium sulfat 30% dan 40% yaitu pada elusi bufer fosfat IO mM pH 7 dengan amonium sulfat21 % (perlakuan ammonium sulfat 30%) dan elusi bufer fosfat 10 mM pH 7 dengan amonium sulfat 8 % (perlakuan ammonium sulfat 40% ). Sedangkan pada perlakuan amonium sulfat 10% dan 20% tidak mendapatkan pita tebal berukuran 32 kDa Hasil uji aktivitas juga menunjukkan nilai yang relatif tinggi pada purifikasi kolom Phenyl Sepharose elusi bufer fosfat 10 mM pH 7.0 mengandung amonium sulfat 21 % pada perlakuan amonium sulfat 30% yaitu 0.167, sedangkan pada kontrol (tanpa enzim) hasil 0.012 pada absorbansi 585 nm