Isolasi, Konstruksi Vektor dan Ekspresi Isopenisilin N Synthase dari Penicillium chrysogenum di Escherichia coli BL21 (DE3)

Abstract

Ekspresi protein yang berlebih (overexpression) di Escherichia coli dapat memicu terbentuknya badan inklusi. Strategi dalam meminimalisir terbentuknya badan inklusi dapat dilakukan dengan mengidentifikasi beberapa faktor yang berpengaruh seperti konsentrasi inducer IPTG, suplementasi gula dan suhu kultivasi. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan konstruksi vektor ekspresi untuk gen pcbC penyandi isopenisillin N synthase (IPNS) dan identifikasi kondisi media tumbuh. Gen pcbC telah berhasil disisipkan ke dalam vektor pET32a sehingga terbentuk vektor ekpresi rekombinan pET32a::pcbC. Vektor rekombinan ini telah berhasil dimasukkan ke dalam E. coli BL21 (DE3) sebagai host ekspresi. E. coli BL21 (DE3) berhasil mensintesis protein target IPNS. Sintesis IPNS yang optimum terjadi pada kondisi media yang mengandung 0,1 mM IPTG, 1% sukrosa, 1% mannitol atau 1% sorbitol pada suhu kultivasi 20 oC