Aktivitas Senyawa Antioksidan Asal Bakteri Endofit Hoya multiflora Blume pada Tingkat Seluler Melalui Pengujian pada Schizosaccharomyces pombe

Abstract

Bakteri endofit yang diisolasi dari jaringan tumbuhan dapat menghasilkan metabolit sekunder yang sama dengan tanaman inangnya. Salah satu senyawa aktif yang mampu dihasilkan bakteri endofit ialah antioksidan. Antioksidan ialah suatu inhibitor radikal bebas. Penelitian sebelumnya, telah berhasil mengisolasi bakteri endofit dari Hoya multiflora. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis aktivitas antioksidan isolat bakteri endofit tanaman H. multiflora secara in vitro dan aktivitasnya pada tingkat seluler dengan menggunakan mikrob model Schizosaccharomyces pombe. Penelitian ini dilakukan dengan beberapa tahap, yakni peremajaan isolat bakteri endofit HMB1 (Bacillus siamensis) dan HMD4 (Bacillus aryabhattai) serta produksi ekstrak bahan aktif. Ekstrak bahan aktif kemudian diuji kandungannya dengan fitokimia dan dilakukan analisis kadar flavonoid dan fenol. Ekstrak yang didapatkan serta supernatan kemudian diujikan aktivitas antioksidannya dengan DPPH (1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), dan ditinjau aktivitasnya pada tingkat seluler pada S. pombe. Hasil rendemen ekstrak bahan aktif yang didapatkan dari isolat B. siamensis HMB1 sebesar 0,0156% dan isolat B. aryabhattai HMD4 0,0083%. Pengujian antioksidan pada supernatan kedua isolat memiliki nilai IC50 yang tinggi, sedangkan ekstrak bahan aktif menunjukkan aktifitas yang lebih baik dengan nilai IC50 lebih rendah, ekstrak bahan aktif B. siamensis HMB1 memiliki nilai IC50 51,18 mg/mL dan B. aryabhattai HMD4 memiliki nilai 54,15 mg/mL. Ekstrak bahan aktif kedua isolat diketahui mengandung beberapa golongan senyawa, diantaranya fenol, alkaloid, steroid dan terpenoid. Kadar fenol dari ekstrak bahan aktif B. siamensis HMB1 dan B. aryabhattai HMD4 berturut-turut ialah 26,17 mg fenol EAG/g dan 16,86 mg fenol EAG/g, sedangkan untuk kadar flavonoid berturut-turut ialah 8,70 mg flavonoid EQ/g dan 9,83 mg flavonoid EQ/g. Pendeteksian senyawa aktif asal ekstrak bahan aktif B. aryabhattai HMD4 menggunakan LC-MS mendeteksi adanya senyawa pyridoxamine yang berpotensi sebagai antintioksidan. Pengujian cekaman oksidatif menunjukkan bahwa ekstrak bahan aktif dapat meningkatkan toleransi dari S. pombe pada cekaman H2O2, dimana ekstrak bahan aktif isolat B. aryabhattai HMD4 memiliki efek yang lebih baik dari pada B. siamensis HMB1 secara kualitatif. Aktifitas B. aryabhattai HMD4 secara siginifikan juga meningkatkan pertumbuhan jumlah koloni di bawah cekaman H2O2. Analisis aktivitas enzim katalase intraseluler menunjukkan bahwa ekstrak B. aryabhattai HMD4 menurunkan produksi enzim katalase pada pemberian cekaman. Sehingga, ekstrak bahan aktif B. aryabhattai HMD4 memiliki kemampuan dalam meningkatkan toleransi S. pombe dalam menghadapi cekaman oksidatif. Hal ini mengindikasikan potensi ekstrak B. aryabhattai HMD dalam meregulasi mekanisme respon cekaman oksidatif pada level seluler.