Konstruksi Vektor Rekombinan untuk Mengedit Gen Lanceolate Menggunakan Sistem CRISPR/Cas9 pada Tanaman Tomat (Solanum lycopersicum L.).

Abstract

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR associated 9 protein (CRISPR/Cas9) adalah salah satu alat untuk mengedit genom yang baru-baru ini telah berhasil digunakan untuk berbagai tanaman. Tomat (Solanum lycopersicum L.) adalah tanaman model yang ideal untuk menguji sistem CRISPR/Cas9 dalam pengeditan gen karena ketersediaan metodologi transformasi yang efisien dan ketersediaan urutan genom yang berkualitas tinggi, dan mempunyai genom diploid. Tujuan dari penelitian ini adalah membuat konstruksi vektor rekombinan yang membawa oligonukleotida gRNA untuk memutasikan gen lanceolate (LA) pada tanaman tomat. Gen lanceolate merupakan gen yang terlibat dalam pembuatan daun majemuk pada tomat. Supresi gen LA akan membuat daun majemuk berukuran besar berubah menjadi daun tunggal berukuran kecil. Oligonukleotida gRNA berhasil disisipkan ke dalam vektor pRGEB32 sehingga memperoleh vektor rekombinan. Vektor rekombinan ini berhasil diintroduksikan ke dalam Escherichia coli DH5α dan dipindahkan ke dalam Agrobacterium tumefaciens LBA4404 menggunakan metode triparental mating. Koloni PCR mengonfirmasi bahwa oligonukleotida gRNA berhasil disisipkan ke dalam pRGEB32 dan A. tumefaciens LBA4404 mengandung plasmid rekombinan ini.