Pc13-35s-Intron-Sma: Vektor Biner Fleksibel Untuk Ekspresi Gen Target Secara Konstitutif Pada Transformasi Tanaman Melalui Agrobacterium.

Abstract

Teknik penyisipan gen target ke dalam tanaman menggunakan vektor alami Agrobacterium telah menjadi hal rutin dalam perakitan tanaman transgenik. Bakteri ini memiliki kemampuan dalam menyalin, memindahkan, dan menyisipkan daerah T-DNA ke dalam kromosom tanaman yang berada pada vektor biner. Vektor biner pC13-35S-Intron-Sma memungkinkan gen target yang disisipkan pada situs SmaI (CCCGGG) diatur ekspresinya oleh promoter kuat 35S dan terminator Nos untuk membentuk cassette ekspresi dengan cepat. Gen target akan mendapat tambahan intron (cat1) di ujung 5’- dan 6 kali histidin di ujung karboksil. Keberadaan intron untuk memastikan ekspresi gen target tidak berasal dari Agrobacterium. Komponen 6 kali histidin dapat berfungsi sebagai penanda untuk purifikasi dan deteksi pada tingkat protein. Untuk mengetahui keberhasilan dari konstruksi pC13-35S-Intron-Sma disisipkan gen enhanced green fluorescent protein (eGFP) pada situs SmaI membentuk pC13-35S-Intron-eGFP dan ditransformasi ke padi varietas Nipponbare menggunakan Agrobacterium EHA105. Infeksi dilakukan pada kalus yang berumur lima hari dan ditanam pada media kultivasi. Pengamatan kalus transforman yang berusia satu bulan setelah infeksi menunjukkan adanya sinyal ekspresi eGFP dengan terbentuknya pendaran berwarna hijau di bawah sinar biru. Hasil ini menunjukkan bahwa vektor biner pC13-35S-Intron-Sma dapat digunakan untuk transformasi tanaman dengan Agrobacterium.