Karakterisasi dan Pemurnian Enzim Selulase Kapang Endofit dari Lamun (Enhalus sp.)

Abstract

Selulase merupakan enzim ekstraseluler yang mampu mendegradasi selulosa menjadi senyawa yang lebih sederhana. Selulase terdiri atas enzim endoglukanase, eksoglukanase, dan β-glukanase. Enzim selulase selama ini dihasilkan oleh kapang yang diisolasi dari organisme dan ekosistem darat, padahal kapang yang diisolasi dari organisme laut juga memiliki potensi untuk menghasilkan selulase namun keberadaannya belum banyak dikaji. Selulase pada penelitian ini dihasilkan oleh kapang endofit yang diisolasi dari lamun (Enhalus sp.). Substrat yang digunakan yaitu limbah agar-agar. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan waktu produksi, mengkarakterisasi dan memurnikan enzim selulase kapang endofit yang diisolasi dari lamun (Enhalus sp.). Penelitian dilakukan dalam tiga tahap yaitu penentuan konsentrasi limbah agar-agar dan waktu inkubasi kapang penghasil selulase, karakterisasi ekstrak kasar enzim selulase, dan pemurnian enzim selulase. Parameter yang diuji yaitu aktivitas endoglukanase, β-glukosidase, dan selulase total. Aktivitas selulase tertinggi yaitu aktivitas endoglukanase dengan penambahan 1,5% limbah agar-agar yang diinkubasi selama sembilan hari. Selulase bekerja optimum pada pH 4 dan suhu 60 oC dengan substrat CMC. Perhitungan kinetika enzim menunjukkan nilai Km enzim endoglukanase sebesar 0,244% dengan Vmaks 0,052 U/mL. Ion logam Hg2+ dengan konsentrasi 5 mM menghambat aktivitas enzim endoglukanase hingga 74%. Pengendapan untuk mendapatkan aktivitas spesifik tertinggi yaitu penambahan aseton dengan kejenuhan 10%. Pemurnian dilakukan menggunakan kromatografi filtrasi gel Sephadex G-100. Hasil penentuan bobot molekul enzim endoglukanase diperoleh empat bobot molekul yaitu 217,96 kDa, 163,15 kDa, 129,41 kDa, dan 76,84 kDa. Kelipatan pemurnian enzim endoglukanase setelah pemurnian meningkat 17,571