Produksi, Purifikasi dan Karakterisasi a-Amilase dari Isolat Lokal Bakteri Termofilik TII12

Abstract

Penggunaan a-amilase di Indonesia cukup besar dan semakin meningkat dari waktu ke waktu. a-Amilase selain banyak digunakan dalam industri gula cair juga dimanfaatkan dalam industri non pangan seperti industri tekstil, dan deterjen. Didukung potensi mikroorganisme penghasil a-amilase yang cukup tinggi di Indonesia, dan upaya meningkatkan nilai ekonomi tapioka maka dilakukan penelitian mengenai produksi, purifikasi dan karakterisasi a-amilase dari isolat bakteri lokal. Tujuan penelitian ini adalah mengekspose kemampuan isolat lokal bakteri termofilik TII12 yang berpotensi untuk menghasilkan a-amilase dengan memproduksi, mempurifikasi dan melakukan karakterisasi a-amilase yang dihasilkan oleh isolat TII12 tersebut. Penelitian ini diawali dengan melakukan identifikasi isolat bakteri TII2 secara morfologi dan fisiologi. Selanjutnya produksi enzim dilakukan dalam fermentor 5 liter, pada pH 6,5; suhu 50°C, agitasi 300 rpm, dan aerasi 1,5 vvm selama 48 jam. Pengamatan dilakukan pada jam-jam tertentu terhadap biomassa sel, aktivitas enzim, gula reduksi dan protein terlarut, yang bertujuan untuk menentukan waktu yang tepat dalam produksi enzim. Karakterisasi enzim yang dilakukan meliputi suhu dan pH optimum enzim, stabilitas enzim terhadap pH dan suhu, konstanta kinetika (Km dan Vmaks), studi inhibisi dan aktivasi, pengaruh ion kalsium terhadap termostabilitas enzim, dan analisis produk hidrolisis enzimatik dengan Kromatografi Lapis Tipis dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, serta visualisasi protein a-amilase secara N-PAGE. Tahapan purifikasi enzim meliputi supernatan hasil mikrofiltrasi dilanjutkan dengan ultrafiltrasi yang diberi perlakuan laku aliran dan kadar pemekatan, kemudian pengendapan dengan aseton dingin, dan filtrasi gel Sephadex G-100.