Isolasi dan karakterisasi enzim proteolitik dari ekstrak tape

Abstract

Tape ketan putih merupakan produk fermentasi beras ketan putih oleh bantuan ragi. Bakteri di dalamnya diduga mengandung enzim protease fibrinolitik yang dapat membantu proses penguraian darah beku. Penelitian ini bertujuan mengisolasi bakteri tersebut lalu mencirikan enzim yang dihasilkannya. Ada 9 isolat yang diujikan, dan diketahui isolat TP-4 diketahui memiliki aktivitas protease maksimum, yaitu 0.724 U/ml. Ektrak enzim protease yang dihasilkan dimurnikan melalui beberapa tahapan: (1) presipitasi amonium sulfat 65%, (2) dialisis (cut off 10 kD), dan (3) pemekatan dengan poli(etilena glikol) (PEG). Hasil aktivitas spesifik dialisat adalah 0.881 U/mg dengan tingkat kemurnian 0.701 dibandingkan dengan ekstrak enzim kasar (1.257 U/mg). Analisis SDS-PAGE 10% pada enzim kasar, presipitat, dan dialisat mempunyai 1 buah pita protein (11.60 kD). Uji zimografi menunjukkan bahwa enzim protease ini mempunyai aktivitas kaseinolitik, fibrinolitik, dan gelatinolitik. Ekstrak enzim kasar dihambat secara spesifik oleh etilenadiamina tetraasetat sehingga digolongkan ke dalam kelompok protease logam sedangkan dialisat dihambat secara spesifik oleh N-p-tosil-L-lisinklorometil keton, dan fenilmetilsulfonil fluorida sehingga digolongkan ke dalam protease serin.