Kloning fragmen DNA genom yang terlibat dalam toleransi asam-alumunium pada Bradyrhizobium japonicum melalui mutagenesis dengan transposon

Abstract

Bakteri bintil akar Bradyrhizobium japonicum sensitif asam-aluminium telah berhasil dikonstruksi melalui metode mutagenesis dengan transposon untuk mengetahui gen yang terlibat dalam toleransi asam-aluminium pada B. japonicum. pUTmini-Tn5Km1 yang dibawa oleh Escherichia coli S17-1 (? pir) di transfer ke dalam sel B. japonicum toleran asam-Al melalui konjugasi dengan tiga waktu inkubasi mating yang berbeda. Mutan BJ 11 (25) diketahui tidak mampu tumbuh pada media Ayanaba (pH 4.5) yang ditambahkan 50 mM aluminium . Fragmen DNA sebesar 0.8 kb berhasil diisolasi dari genom BJ 11 (25) menggunakan teknik inverse polymerase chain reaction (Inverse PCR). Fragmen DNA tersebut kemudian diklon ke dalam plasmid pGEMT-Easy (~3 kb) menghasilkan plasmid rekombinan yang didesain sebagai pGEMT- 11 (~3.8kb).