Pemurnian dan pencirian protease dari isolat bakteri W-1 yang dihasilkan oleh tauco hitam

Abstract

Enzim protease dari isolat bakteri W-1 yang diisolasi dari tauco hitam memiliki aktivitas fibrinolitik. Penelitian ini bertujuan memurnikan dan mencirikan protease dari isolat bakteri yang diisolasi dari tauco hitam yang merupakan salah satu makanan fermentasi tradisional Indonesia. Ekstrak enzim dimurnikan dengan presipitasi amonium sulfat kejenuhan 70%, dialisis (cut off 10 kD), dan kromatografi penukar ion DEAE Sepharose. Pemurnian menghasilkan satu fraksi enzim aktif. Aktivitas spesifik fraksi aktif adalah 3.860 U/mg dengan tingkat kemurnian 11.42 kali dibandingkan dengan ekstrak enzim kasar. Hasil analisis SDS-PAGE 15% memperlihatkan fraksi aktif protease terdiri atas 2 pita protein (29.7 dan 33.3 kD). Aktivitas optimum protease dicapai pada suhu 50oC dan pH 7. Uji zimogram 15% memperlihatkan bahwa protease mampu menghidrolisis substrat kasein dan fibrinogen dengan konsentrasi 0,01% (b/v). Aktivitas enzim protease menurun dengan adanya penambahan ion Na+, K+, Mg2+, Mn2+, dan Cu2+ (5 mM). Protease ekstrak kasar dihambat spesifik oleh inhibitor fenilmetilsulfonilklorida, N-p-tosil-L-lisin klorometilketon, dan soybean trypsine inhibitor sehingga digolongkan ke dalam kelompok protease serina.