Kloning Dua Kandidat Gen yang Terlibat Dalam Biosintesis Magnetosom pada Magnetospirillum magneticum AMB-1 di Escherichia coli

Abstract

Magnetospirillum magneticum AMB-1 adalah salah satu strain bakteri magnet yang mampu mensintesis magnetosom. Magnetosom pada M. magneticum AMB-1 merupakan partikel magnetit berukuran nano yang diselimuti membran, dan mampu memberikan kemampuan magneto-aerotaksis pada bakteri magnet. Pembentukan magnetosom pada sel bakteri magnet dikontrol secara genetik. Sampai saat ini telah diketahui setidaknya ada 36 gen yang terlibat dalam biosintesis magnetosom, dua open reading frame (ORF) diantaranya adalah ORF 14 dan ORF 38.0. Kedua ORF tersebut dalam penelitian ini dianalisis secara bioinformatika dan diintroduksikan kedalam sel E. coli DH5á menggunakan vektor kloning pGEMT-Easy. Hasil analisis bioinformatika untuk ORF 14 menunjukkan bahwa gen tersebut mengkode protein yang memiliki homologi sebesar 90% dengan domain GGDEF pada Magnetospirillum magnetotacticum MS-1. Sedangkan hasil analisis bioinformatika untuk ORF 38 menunjukkan bahwa gen tersebut memiliki homologi sebesar 70% dengan 6- hydroxynicotinate reductase pada Bradyrhizobium sp. BTAi1. Verifikasi hasil kloning kedua ORF dilakukan melalui pemotongan plasmid rekombinan menggunakan enzim restriksi EcoRI, NdeI, dan BamHI; serta PCR koloni. Verifikasi hasil kloning membuktikan bahwa kedua ORF telah berhasil diintroduksi ke dalam sel E. coli DH5á.