Produksi Khimera Mencit dengan Metode Agregasi Embrio

Abstract

Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari kapasitas perkembangan in vitro dan morfometri dari embrio tunggal dan agregat embrio serta aspek fenotip dari mencit khimera. Embrio khimera diproduksi dengan agregasi embrio tahap 8 sel dari dua strain mencit dengan warna rambut yang berbeda (putih dan coklat). Komposisi agregasi yang dilakukan antara embrio mencit coklat dengan embrio mencit putih adalah 1:1, 2:1 dan 3:1. Variabel yang diukur terdiri dari aggregation rate, perkembangan embrio, ukuran embrio, jumlah sel blastosis dan penampilan eksterior (fenotip). Koleksi embrio tahap 8 sel dilakukan pada tuba falopii dari mencit donor pada hari ketiga setelah fertilisasi in vivo. Untuk mendapatkan jumlah embrio yang banyak pada saat bersamaan dilakukan superovulasi dan sinkronisasi dengan injeksi 5 IU PMSG dan 5 IU hCG intraperitoneum dengan interval 46 jam. Zona pelusida dihilangkan menggunakan enzim pronase 0,25% dan agregasi dilakukan dengan mikro manipulasi secara fisik. Selanjutnya embrio dikultur in vitro dalam medium CZB dengan kondisi 5% CO2 pada suhu 37°C selama 48 jam. Sebagian blastosis yang diperoleh ditransfer ke betina bunting semu hari ke-4, sisanya digunakan untuk analisis sitologis.