Konstruksi DNA Rekombinan Plasmid Pcambia 1301-chi Untuk Ketahanan Terhadap Penyakit Busuk Pangkal Batang Pada Tanaman Kelapa Sawit (Elaeis guineensis jacq)

Abstract

Usaha peningkatan perkebunan kelapa sawit secara rutin tidak terlepas dari masalah hama dan penyakit, antara lain cendawan patogenik Ganoderma spp. Pendekatan yang umum dilakukan uDtuk pengendalian penyakit tersebut antara lain ialah dengan cara mekanis, kimia, atan hayati. Pendekatan lain untuk mengatasi masalah tersebut ialah pemakaian bibit unggul tahan penyakit. Rekayasa genetik menggunakan gen kitinase dilaporkan mampu menghasilkan ketahanan terhadap serangan cendawan patogenik pada tanaman padi . Penelitian ini bertujuan menyediakan dan menguji vektor (pCambia 1301) yang dapat membawa gen kitinase, menyediakan gen chi, mengkonstruksi dan menguji DNA rekombinan serta mentransformasi DNA rekombinan ke tanaman. pCambia dan pBS-G 11 diisolasi dengan Quantum mini prep dari Biorad. se1anjutnya gen chi dalam pBS-G 11 dimurnikan dengan elektroelusi. Konfinnasi keberhasilan kontruksi DNA rekombinan dilakukan dengan metode isolasi plasmid metode Speedy dan dipotong dengan Hindlli. Selanjutnya DNA rekombinan dari E. coli ditransfer ke Agrobocterium tume/aciens dengan metode triparental mating. Keberhasilan metode ini dianaiisis dengan tri-parental mating balik dan seleksi antibiotik Penelitian ini telah berhasi menyisipkan gen chi Ire dalam pCambia-1301. DNA rekombinan terkonstruksi sudah dapat dibuktikan dengan isolasi plasmid metode Speedy. Restriksi DNA rekombinan dengan Hindlll menghasilkan 2 pita, yaitu 12 kb adalah pCambia 1301 dan 1.5 kb adalah gen chi. T ransformasi DNA rekombinan Ire dalamAgrobacterium tume/aciens LBA 4404 telah berhasil dilalrukan dengan metode tri-parental mating. Keberhasilan teknik tri-parental mating sudah dapat dibuktikan dengan teknik tri-parental mating balik dan seleksi antibiotik. Kelemahan metode ini ialah waktu yang digunakan relatif lebih lama dibandingkan analisis dengan menggunakan peR