Karakterisasi Enzim Protease Fibrinolitik Termostabil dari Ekstrak Kasar Cacing Tanah Pheretima asiatica Strain Lokal

Abstract

Pheretima asiatica adalah salah satu jenis cacing tanah yang memiliki potensi besar sebagai antitrombolitik. Cacing tanah dapat mensekresikan protease dengan degradasi kasein, gelatin, dan fibrin. Protease dari P. asiatica dihasilkan dengan mengekstrak dalam 50 mM bufer fosfat pH 7,0, kemudian disentrifus dengan kecepatan 12000 rpm pada suhu 4°C selama 10 menit. Analisis aktivitas enzim maksimum pada ekstrak dilakukan dengan memanaskan ekstrak pada selang suhu 50-80°C dan selang waktu 5-20 menit untuk memperoleh enzim termostabil. Ekstrak kasar P. asiatica memberikan aktivitas maksimum pada suhu 65°C selama 10 menit dengan aktivitas spesifik sebesar 3,8723 U/mg, kemudian digunakan untuk karakterisasi selanjutnya secara kuantitatif (suhu, pH, inhibitor, dan sodium dodecyl sulphate-polyacrilamide/SDS-PAGE dan kualitatif (zimogram). Analisis SDS-PAGE menunjukkan tiga pita protein (16,5; 19,9; dan 23,9 untuk ekstrak yang dipanaskan terlebih dahulu dan 15,7; 20,8; dan 23,9 kD untuk ekstrak tanpa pemanasan. Zimogram kasein menunjukkan dua pita kaseinolitik untuk ekstrak dengan pemanasan dan tanpa pemanasan. Sedangkan untuk zimogram fibrinogen menunjukkan dua pita untuk ekstrak dengan pemanasan dan empat pita untuk ekstrak tanpa pemanasan pada suhu 65°C selama 10 menit.