Isolasi Fragmen DNA yang Mengandung Gen Penyandi Glutathione S Transferase dari Pustaka Genom Kedelai Kultivar Lumut

Abstract

Isolasi gen penyandi Glutathione S Transferase (GST) dilakukan melalui penapisan pustaka genom kedelai kultivar Lumut di dalam fage A dengan menggunakan gen penyandi GST dari Arabidopsis thaliana sebagai pelacak. Gen penyandi GST dari A. thaliana diperbanyak dengan Polymerase Chain Reaction lalu dilabel dengan alkalin fosfatase. Penapisan dilakukan terhadap 105 pfu (plaque forming unit) fage A yang mengandung pustaka genom kedelai kultivar Lumut. Fage yang menghasilkan sinyal positif dari hasil hibridisasi southern diisolasi dari media dan diinduksi untuk melakukan proses eksisi di dalam E. coli galur BM 25.8. Plasmid rekombinan diisolasi kemudian diintroduksikan ke dalam E. coli galur DH5a untuk mengamplifikasi plasmid rekombinan. Plasmid rekombinan hasil isolasi terhadap koloni yang tumbuh dipotong dengan enzim EcoR1, kemudian ditransfer ke membran nilon Hybond N¹. Analisis hibridisasi southern menunjukkan bahwa lima klon yaitu L2 1/1/1, L2 1/3/1, L2 2/2/1/1, L2 2/2/1/2 dan L2 3/1/2 mengandung gen penyandi GST atau potongannya pada fragmen-fragmen EcoR1 berukuran 2.5 kb, 3.7 kb dan 5.3 kb.