Isolasi Lakase dari Jamur Pelapuk Putih PSM01 dengan Teknik Kromatografi Penukar lon dan Filtrasi Gel

Abstract

Lakase (EC.1.10.3.2) merupakan glikoprotein ekstraselular yang mengandung atom tembaga. Enzim ini bekerja mengoksidasi satu elektron dari senyawa fenolik dengan memanfaatkan oksigen sebagai penerima dan menghasilkan produk berupa senyawaan kuinon atau radikal fenoksi bebas. Dalam pulp sulfat, enzim tersebut akan mendegradasi residu lignin sehingga pulp menjadi lebih putih dan bermutu tinggi. Pemutihan pulp sulfat secara enzimatik dinilai menguntungkan karena prosesnya sederhana, ekonomis, dan limbahnya tidak mencemarkan lingkungan. Umumnya lakase diisolasi dari jamur pelapuk putih, salah satu diantaranya adalah PSM01 sebagai isolat potensial dari Indonesia. Berdasarkan aktivitas spesifiknya didapatkan bahwa kemurnian lakase PSM01 lebih tinggi daripada lakase komersial Rhus vernicifera (Sigma). Di samping mediator, kemurnian enzim juga mempengaruhi laju degradasi residu lignin dalam pulp sulfat. Pemurnian lakase dari PSM01 dilakukan dengan presipitasi amonium sulfat kejenuhan 80%, dialisis dengan ultrafiltrasi, kolom penukar anion Streamline DEAE, dan kolom filtrasi gel Superdex 75 prep grade. Kemurnian dan estimasi bobot molekul lakase PSM01 diuji dengan elektroforesis native PAGE. Eluat Superdex 75 prep grade dapat meningkatkan aktivitas spesifik lakase menjadi 118,93 U/mg atau 88,1 kali lebih murni dibandingkan dengan ekstrak kasarnya. Eluat ini belum murni karena masih memiliki empat pita protein. Bobot molekul lakase PSM01 diperoleh sebesar 22.591 Da. Lakase PSM01 mengoksidasi substrat 2,6-dimetoksifenol 4 mM secara optimum pada pH 4,5 (bufer suksinat 0,2 M) dan suhu 60°C dengan nilai aktivitas sebesar 45,66 U/ml. Ion Cu (konsentrasi 1 mM) berlaku sebagai kofaktor bagi lakase, sedangkan ion-ion logam lainnya justru menginhibisi lakase. Nilai Km dan Vmaks lakase PSM01 diperoleh masing-masing 0,49 mM dan 0,97 A.menit