Metode Ultrasentrifugasi untuk isolasi Eksosom Asal Sel HEK293 sebagai Kandidat Model In-Vitro Imunoterapi Kanker Payudara

Abstract

Eksosom dapat disekresikan oleh semua sel, ditemukan pada semua cairan tubuh, dan mampu menyediakan sistem biologis. Eksosom memiliki potensi besar dalam imunoterapi kanker, memiliki peran dan target yang berbeda. Metode ultrasentrifugasi, telah banyak digunakan dalam menghasilkan eksosom dari berbagai sumber, yang terkandung dalam endapan protein hasil ultrasentrifugasi. Penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi eksosom yang berasal dari sel HEK293, menggunakan metode ultrasentrifugasi dan diaplikasikan secara in-vitro pada sel MCF-7. Eksosom ditambahkan pada sel MCF-7 dengan konsentrasi yang berbeda, yaitu 3,5 µg/ml, 7 µg/ml, dan 14 µg/ml dan dievaluasi menggunakan penanda P53 dan PCNA. Studi ini menunjukkan bahwa eksosom telah berhasil diisolasi; dengan konsentrasi protein 24,95 µg/ml dan mengekspresikan penanda eksosom yaitu CD9 dan CD81. Sel MCF-7 yang diberi perlakuan eksosom dan menunjukkan morfologi yang normal yaitu epithelial-like. Konfluensi populasi sel teramati menurun pada konsentrasi yang lebih tinggi, seiring dengan menurunnya persentase viabilitas sel. Penanda P53 diekspresikan lebih tinggi pada penambahan eksosom 14 ug/ml dan PCNA diekspresikan lebih rendah dari sel MCF-7 tanpa perlakuan. Hasil ini menunjukkan bahwa eksosom berhasil diisolasi pada penelitian ini, mampu menghambat pertumbuhan sel kanker MCF-7 secara in-vitro, berpotensi sebagai kandidat agen terapeutik kanker.

Exosomes are secreted by all cells and found in all body fluids, providing the biological system. They have great potential in cancer immunotherapy and have different roles and targets. Exosomes can be isolated by the ultracentrifugation method, widely used to produce exosomes from various sources and intended to pellet containing heterogeneous particles and the exosomes. In this study, we isolated exosomes derived from HEK293 cells using the ultracentrifugation method and applied directly in vitro to MCF-7 cells. The exosomes were added to the MCF-7 cells at various concentrations, 3,5 µg/ml, 7 µg/ml, and 14 µg/ml evaluated using P53 and PCNA markers. The study showed that the exosomes had been successfully isolated; the concentration obtained was 24,95 µg/ml and expressed exosome markers CD9 and CD81. The MCF-7 cells were treated by exosome and demonstrated epithelial-like morphology. The cell population survived, but the confluency decreased at higher concentrations, as did viability. The marker of P53 and PCNA expression resulted from the effect of exosome treatment. The results indicate that the exosome can potentially inhibit the growth of breast cancer cells in vitro.