Pengembangan Metode Kloning Gen Penyandi Trypsin Inhibitor Sengon (Falcataria moluccana Miq.)

Abstract

Kendala utama pengembangan hutan tanaman sengon (Falcataria moluccana Miq.) adalah serangan hama boktor (Xystrocera festiva). Secara alami, sengon memiliki mekanisme pertahanan biokimia terhadap boktor, salah satunya yaitu trypsin inhibitor (TI). Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan metode untuk isolasi dan kloning DNA penyandi TI asal tanaman sengon. Percobaan meliputi tiga tahap yaitu ekstraksi DNA sengon, Polymerase Chain Reaction (PCR) dengan primer penyandi TI dari tanaman lain, dan kloning hasil PCR. Ekstraksi DNA dari daun sengon dilakukan dengan metode CTAB I, CTAB II dengan modifikasi kit Purelink®, kit Purelink® Plant Total DNA purification, dan Qiagen® DNeasy plant miniprep kit yang ditambahkan PVP 26%. Hasil terbaik dari Qiagen® DNeasy plant miniprep kit dengan konsentrasi DNA 100 ng/μL. Reaksi PCR dilakukan dengan GoTaq® PCR Core Systems, PCR Supermix Invitrogen, GoTaq® DNA Polymerase, dan Platinum® Taq DNA Polymerase, dan yang berhasil memunculkan pita amplikon PCR menggunakan primer BTIw1 yaitu GoTaq® PCR Core Systems dengan konsentrasi hasil PCR 438 ng/μL. Kloning dilakukan dengan tiga metode yaitu heat shock CaCl2, heat shock Transformation buffer, dan Thermoscientific® InsTAclone PCR cloni