Ekspresi heterologus gen interferon alfa 2 manusia: isolasi, kloning, dan sekuensing

Abstract

Interferon alfa 2 manusia (Hu-IFNo:.2) merupakan zat antivirus dan antitumor yang lelah diakui penggunaannya untuk mengobati berbagai penyakit keganasan dan penyakit akibat virus. Penggunaannya di Indonesia l!lasih terbatas karena harga obat ini di luar jangkauan kemampuan masyarakat. Penelitian ini bertujuan mengisolasi gen Hu-IFNa2 yang pada akhirnya akan dieksprcsikan untuk tujuan produksi protein IFNa2 dalam skala induslri. Penelitian diawali dengan studi bioinformatika untuk mcnentukan urutan nuklcotida gen Hu-IFNa2 dan daerah sekitarnya. Data yang diperoleh digunakan sebagai landasan dalam merancang sepasang primer yang digunakan untuk mengisolasi gen tersebut dari DNA genom rnanusia dcngan teknik PCR (Polymerase Chain Reaction). Dari proses ini dipcroleh fragmen DNA berukuran 797 pb yang merupakan kandidat gen Hu-IFNa2• Fragmcn DNA disisipkan kc dalam vcktor pGEM®-T, dilanjutkan dcngan transformasi kc dalam sci E. coli. Dari sepuluh koloni transforman yang plasmidnya diisolasi dan ukuran i11sert-nya dipcriksa dengan teknik PCR, ternyata sembilan koloni merniliki ukuran insert yang scsuai ( 1.047 pb). Urutan nukleotida kandidat gen Hu-IFNa2 terscbut dipcriksa menggunakan Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (AB!) serla dianalisis mcnggunakan Automatic DNA Sequencer AB! Prism 377. Hasil analisis menunjukkan bahwa henar gen yang diisolasi mcrupakan gen Hu-IFNa2• Gen ini siap untuk disubklon ke dalam suatu vektor cksprcsi untuk mcnghasilkan protein IFNa2•