Pengembangan Produksi Enzim Pektinase dari Aktinomisetes untuk produksi Pektioligosakarida
Date
2023Author
Hasanah, Neneng
Rahayuningsih, Mulyorini
Rahayuningsih, Mulyorini
Rahmani, Nanik
Metadata
Show full item recordAbstract
Indonesia mempunyai megabiodiversitas mikroba yang luar biasa baik dari
mikroba darat maupun mikroba laut yang potensial untuk digunakan sebagai
sumber enzim baru termasuk pektinase. Aktinomisetes diketahui mempunyai
potensi sebagai penghasil berbagai senyawa bioaktif dan penghasil enzim untuk
aplikasi di berbagai industri termasuk industri pangan. Oleh karena itu perlu
dilakukan penapisan terhadap koleksi isolat Aktinomisetes laut koleksi InaCC
untuk mendapatkan kandidat isolat unggul penghasil pektinase yang mempunyai
kemampuan menghidrolisis pektin untuk produksi pektioligosakarida (POS).
Penapisan aktinomisetes darat dan identifikasi secara molekuler 16S rRNA yang
dilakukan pada penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa aktinomisetes darat
penghasil pektinase teridentifikasi sebagai Kitasatospora sp. Penelitian ini
difokuskan untuk melakukan penapisan aktinomisetes laut penghasil enzim
pektinase serta melakukan penelitian lanjutan yaitu proses produksi, purifikasi,
karakterisasi, dan analisis potensinya untuk produksi POS dari substrat pektin.
Penapisan dilakukan dengan menggunakan metode Double Layer Agar (DLA),
kemudian dilakukan tahapan purifikasi enzim pektinase menggunakan kolom
kromatografi penukar anion, dilanjutkan dengan uji karakterisasi serta hidrolisis
substrat pektin untuk produksi pektioligosakarida serta analisis produk hidrolisis
dengan TLC.
Hasil penapisan diperoleh satu isolat unggul penghasil pektinase dengan
diameter zona bening sekitar 3,7 cm pada larutan pH 7,0 yaitu isolat BLH 1-20.
Hasil identifikasi secara molekular dengan sekuen 16S rRNA menggunakan
BLAST menunjukkan bahwa isolat BLH 1-20 tersebut adalah Streptomyces
sampsonii. Hasil karakteriasai uji pH diperoleh nilai aktivitas 5,141 U/mL pada
pH .6.0, sedangkan pada uji suhu diperoleh suhu optimum pektinase pada suhu
30 °C dengan aktivitas sebesar 5,395 U/mL.
Hasil pemurnian enzim pektinase dari Kitasatospora sp. dengan metode
anion exchange menggunakan kolom kromatografi 5 mL QFF secara parsial
menunjukkan kromatogram dengan satu puncak utama pada aktivitas enzim
pektinase maupun protein enzim dengan nilai aktivitas berturut-turut sebesar 0,089
U/mL dan 1,096 mg/mL. Karakterisasi enzim dengan uji pH dan suhu menunjukkan
pH optimum pektinase terdapat pada larutan fosfat pH 8,0 dengan nilai aktivitas
sebesar 0,271806 U/mL, suhu optimum diperoleh pada suhu 40 °C dengan aktivitas
sebesar 0,294 U/mL, dan stabilitas pektinase dicapai pada suhu 40 °C dengan waktu
inkubasi 30 menit sebesar 0,275 U/mL. Hasil analisis TLC menunjukkan
pektioligosakarida yang terbentuk dari hasil hidrolisis pektinase Kitasatospora sp.
terjadi pada jam ke 24 – 96