Konstruksi dan karakterisasi mutan protease Xanthomonas campestris pv. Glycines 8ra hasil mutagenesis transposon

Abstract

Tujuan pada penelitian ini adalah (1) Mengkonstruksi mutan protease negatif X: campestris pv. glycines Sra dengan menggunakan mutagenesis transposon. Dalam hal ini transposon yang digunakan adalah Omegon-Km (Fellay et al., 1989); (2) Mengetahui jcnis protease yang dimiliki oleh X campestris pv. glyci11e.1· Sra; dan (3) Mengklon bagian gen protease yang dapat digunakan untuk mengklon gen struktural galur-galur X cam­pestris pv. glyci11e.1·. Mutagenesis dengan transposon dilakukan dengan konjugasi dua tetua antara X: campes/ris pv. glycines Sra dan E. coli S17-1 (pJFF350). Nilai frekuensi transkonjugasi yang diperoleh adalah I. 9 X 10·7 transkonjugan per resipien. Dari hasil mutagenesis tersebut diperoleh satu mutan protease negatif yaitu X: campestris pv. glyci11es RSSA. Hasil analisis skizotipe dengan Pulsedjield gel electrophoresis (PFGE) menggunakan enzim restriksi Ase I dan SpeI dapat membedakan dengan jelas galur RSSA dengan galur Sra. Plasmid rekombinan pLRD.6 yang diperoleh dari penelitian ini merupakan plasmid yang dikonstruksi dari X campestris pv. g!yci11es RSSA. Pada plasmid tersebut terdapat bagian gen protease yang dapat digunakan sebagai pelacak. Pelacak yang dimaksud adalah fragmen DNA yang berukuran 6.2 kb ketika pLRD.6 dipotong dengan enzim restriksi Asel. Pada penelitian ini pengklonan gen protease dengan pelacak tersebut menghasilkan tiga transforman dengan DNA insert berukuran sekitar 6.2 kb, akan tetapi i11serl tersebut bukan rnerupakan fragrnen DNA yang diinginkan. dst ...