Konstruksi Gen Glukosa Oksidase untuk Subkloning ke dalam Plasmid pPICZα dengan Penambahan Oligonukleotida Penyandi Spacer Peptida

Abstract

Glukosa oksidase (EC 1.1.3.4) merupakan flavoenzim yang berasal dari Aspergillus niger. Enzim Glukosa Oksidase (GOX) intraseluler yang berasal dari A. niger memiliki aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan aktivitas enzim GOX ekstraselulernya. Enzim GOX intraseluler yang berasal dari A. niger memiliki tingkat produksi yang rendah serta proses pemurnian yang cukup rumit. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan gen penyandi GOX yang siap untuk disisipkan ke dalam plasmid pPICZα untuk kemudian diekspresikan pada Pichia pastoris secara ekstraseluler. Perbanyakan plasmid rekombinan pGEM®-T Easy-GOX dilakukan pada sel bakteri Escherichia coli DH5α. Konstruksi gen GOX dilakukan dengan amplifikasi menggunakan PCR. Amplifikasi dilakukan sebanyak dua kali. Ukuran panjang basa yang diperoleh dari hasil amplifikasi kedua sebesar 1787 bp, terdiri atas situs restriksi XhoI dan oligonukleotida penyandi spacer peptida pada ujung 5’ sekuens gen GOX, serta situs restriksi XbaI pada ujung 3’ sekuens gen GOX.