Penyuntingan Empat Gen Terkait Hasil Produksi pada Padi Thailand menggunakan CRISPR-Cas9 : Validasi Gen dan Konstruksi Vektor.

Abstract

Sistem Clustered Regulary Interspaced Short Palindromic Repeats -CRISPR assosiated protein 9 (CRISPR-Cas9) merupakan teknik yang akurat dan efisien sebagai alat untuk memodifikasi genom. Implementasi CRISPR-Cas9 pada padi indica masih jarang digunakan dibandingkan padi japonica. Penelitian ini bertujuan mengkonstruksi vektor rekombinan yang membawa sgRNA untuk mengedit 4 gen pada 2 varietas padi Thailand (JHN dan PTT1). Gen yang menjadi target dalam penelitian ini dalah Tad1, Gn1a, Roc5, dan DL, yang telah diketahui memiliki potensi untuk meningkatkan produksi padi. Lokasi gen target dari dua varietas padi Thailand telah dikonfirmasi dan digunakan untuk merancang single guide RNA. Oligo sgRNA telah disisipkan ke vektor ekspresi pRGEB32 diikuti dengan verifikasi plasmid di Echerichia coli strain XL-1 Blue kemudian ditransformasikan ke Agrobacterium tumefaciens. Hasil percobaan menunjukan oligo sgRNA telah berhasil disisipkan pada pRGEB32 yang dibuktikan dengan PCR koloni dan hasil perunutan DNA. Vektor rekombinan telah berhasil ditransformasi ke dalam A. tumefaciens EHA105 dengan mengintroduksi sel kompeten dengan plasmid rekombinan yang diisolasi dari koloni E. coli positif.