Multiplikasi Tunas dan Termoterapi untuk Eliminasi Banana bunchy top virus pada Pisang cv Mas Kirana secara In Vitro

Abstract

Pisang cv Mas Kirana merupakan salah satu kultivar pisang yang banyak dibudidayakan, terutama di daerah Lumajang karena mempunyai beberapa keunggulan antara lain warna buah menarik, rasa daging buah manis dan segar, teksturnya renyah, dan ukuran buah yang kecil. Penyakit kerdil pisang yang disebabkan oleh infeksi Banana bunchy top virus (BBTV) dianggap sebagai virus penting yang menyebabkan kehilangan hasil pada tanaman pisang di Asia, Afrika, dan Pasifik Selatan. Penggunaan bahan tanaman bebas virus direkomendasikan untuk mencegah penyebaran dan perkembangan penyakit di lapangan. Penelitian ini melibatkan pengumpulan bahan tanaman dari lapangan untuk digunakan sebagai eksplan awal untuk kultur jaringan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui insidensi penyakit di lapangan dan deteksi BBTV di lapangan dengan metode PCR. Hasil penelitian menunjukkan bahwa insidensi penyakit BBTD di lapangan yaitu insidensi penyakit 24,13 34,14% dari total tanaman yang diamati di setiap blok. Gejala infeksi BBTV yang ditemukan di lapangan adalah tanaman pisang yang kerdil, daun tumbuh mengumpul atau membentuk roset di bagian ujung tanaman, dan terjadi klorosis yang disertai adanya nekrosis di sepanjang tepi daun. DNA berukuran sekitar 240 pb berhasil teramplifikasi menggunakan pasangan primer spesifik BBTV sebanyak 10 dari total 24 sampel tanaman. Deteksi dengan menggunakan metode PCR mengkonfirmasi infeksi BBTV pada tanaman bergejala dan tidak bergejala. Salah satu kendala dalam budidaya pisang Mas Kirana yaitu jumlah anakan yang dihasilkan hanya 1-3 anakan. Multiplikasi tunas menjadi aspek penting untuk keberhasilan kultur jaringan. Semakin banyak tunas yang dihasilkan diharapkan akan semakin banyak pula persediaan benih untuk produksi. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mendapatkan jenis dan konsentrasi sitokinin yang optimal untuk multiplikasi tunas pisang cv Mas Kirana. Percobaan dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 8 perlakuan, yaitu zat pengatur tumbuh sitokinin yang berbeda dengan tingkat konsentrasi yang berbeda yang ditambahkan ke dalam media multiplikasi (2 mg L- 1 BAP; 4 mg L-1 BAP; 0,25 mg L-1 TDZ; 0,75 mg L-1 TDZ; 4 mg L-1 Kinetin; 5 mg L-1 Kinetin; 2 mg L-1 BAP + 0,25 mg L-1 TDZ dan kontrol). Selain itu, juga dilakukan konfirmasi apakah planlet hasil kultur jaringan masih terinfeksi BBTV. Hasil percobaan menunjukkan bahwa jenis dan konsentrasi sitokinin yang berbeda nyata hanya pada peubah jumlah tunas. BAP 2 mg L-1 mampu menghasilkan jumlah tunas dengan rata-rata 3,5 tunas. Hasil amplifikasi PCR dari 16 sampel hasil kultur jaringan yang telah disubkultur dua kali terdapat 7 sampel yang terkonfimasi BBTV. Banana bunchy top virus (BBTV) merupakan salah satu virus utama yang menginfeksi tanaman pisang. Berbagai kultivar pisang yang ditanam di Indonesia diketahui rentan terhadap BBTV, termasuk cv. Mas Kirana yang merupakan salah satu pisang komersial yang banyak dibudidayakan. Dilaporkan sebelumnya bahwa termoterapi merupakan salah satu metode eliminasi virus yang efektif pada beberapa tanaman. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh suhu termoterapi yang optimal untuk eliminasi Banana bunchy top virus pada pisang cv. Mas Kirana. Hasil penelitian menyatakan bahwa suhu 30 oC merupakan suhu dengan persentase hidup tertinggi (100%), persentase membentuk tunas sebesar 70%, dan rata-rata jumlah nodul yang dihasilkan adalah 2,33. Hasil konfirmasi BBTV dengan PCR menyatakan bahwa suhu 25 oC, 30 oC, 35 oC, dan 40 oC belum mampu mengeliminasi BBTV melalui metode termoterapi kultur jaringan. Hal ini diduga karena ukuran nodul yang digunakan terlau besar dan subkultur masih dua kali.

Banana cv Mas Kirana is a widely cultivated banana variety, especially in the Lumajang, because it has several advantages, including attractive fruit color, sweet and fresh pulp taste, crunchy texture, and small fruit size. Banana bunchy top disease caused by Banana bunchy top virus (BBTV) infection is considered the most important virus affecting yield losses of banana plants in Asia, Africa, and the South Pacific. Using virus-free plant material is recommended to manage disease spread and development in the field. The research involved collecting plant material from the field to be used as an initial explant for tissue culture. This research aims to determine the incidence of disease in the field and the detection of BBTV in the field by PCR method. The results showed that the incidence of BBTV in the Sukamantri Research Station ranged from 24,13- 34,14% of the total plants observed in each block. Symptoms of BBTV infection found in the field are dwarfed banana plants, leaves that grow clumped or form a rosette at the tip of the plant, and chlorosis with necrosis along the edges of the leaves. DNA bands measuring about 240 bp were successfully amplified using BBTV-specific primer pairs in 10 of 24 plant samples. Detection using the PCR method confirmed the infection of BBTV on symptomatic and asymptomatic plants. One of the problems in the cultivation of banana cv Mas Kirana is that the number of shoots produced is only 1-3. Shoot multiplication is an essential aspect of the success of tissue culture. The more shoots produced, the more the supply of seeds is expected to increase. This study aimed to determine the optimal type and concentration of cytokinin for Mas Kirana micropropagation. The experiment was conducted using a completely randomized design consisting of 8 treatments, i.e. different cytokinin growth regulator in different concentration levels that added to multiplication media (2 mg L-1 BAP; 4 mg L-1 BAP; 0.25mg L-1 TDZ; 0.75 mg L- 1 TDZ; 4 mg L-1 Kinetin; 5 mg L-1 Kinetin; 2 mg L-1 BAP + 0.25 mg L-1 TDZ and control). Furthermore, it was also confirmed whether the tissue culture planlets were still infected with BBTV. The results showed that the type and concentration of cytokinin were significantly different only on the variable number of shoots. BAP 2 mg L-1 produces the number of shoots with an average of 3,5 shoots. PCR amplification results from 16 tissue culture samples that were subcultured twice; seven confirmed BBTV. Banana bunchy top virus (BBTV) is one of the major viruses that infect banana plants. Various banana cultivars grown in Indonesia are known to be susceptible to BBTV, including cv. Mas Kirana is one of the most one of the most widely cultivated commercial bananas. It was previously reported that thermotherapy is one of the effective virus elimination methods in several crops. This study aims to obtain the optimal thermotherapy temperature for eliminating the Banana bunchy top virus in banana cv. Mas Kirana. The results stated that 30 C was the temperature with the highest percentage of survival (100%), the percentage of nodule formation was 70%, and the average number of nodules produced was 2.33. The results of BBTV confirmation by PCR showed that temperatures of 25 oC, 30 oC, 35 oC, and 40 oC could not eliminate BBTV through the tissue culture thermotherapy method. This is probably because the size of the nodules used was too large, and the subculture was still two times.