Purifikasi Parsial dan karakterisasi Enzim Pepsin dari Lambung Ikan Tuna Sirip Kuning (Thunnus albacares).

Abstract

Pepsin adalah proteinase yang utama pada sistem pencernaan dalam lambung hewan. Pepsin berperan dalam hidrolisis protein pada kondisi asam. Informasi dan penelitian mengenai pepsin dari ikan masih belum banyak dilakukan di Indonesia. Pepsin dalam industri banyak digunakan untuk olahan makanan, pakan dan tekstil. Tujuan penelitian ini adalah untuk memurnikan secara parsial dan mengkarakterisasi enzim pepsin dari lambung ikan tuna sirip kuning (Thunnus albacares). Penelitian ini dilakukan melalui tiga tahap, tahap pertama yaitu preparasi lambung ikan tuna sirip kuning dibersihkan kemudian diekstrak untuk mendapatkan ekstrak kasar enzim pepsin dan diukur aktivitas enzim dan konsentrasi proteinnya. Tahap kedua yaitu pemurnian enzim pepsin yang meliputi tahap presipitasi dengan amonium sulfat, dilanjutkan dengan dialisis serta kromatografi filtrasi gel setiap tahap pemurnian dilakukan pengukuran terhadap aktivitas unit enzim, konsentrasi protein dan penentuan bobot molekul. Tahap ketiga yaitu mengkarakterisasi hasil dialisis enzim pepsin yang meliputi penentuan pH optimum, suhu optimum, pengaruh ion logam dan inhibitor. Lambung ikan tuna sirip kuning (Thunnus albacares) memiliki kadar air 76.02%, kadar abu 0.59%, kadar lemak 0.54% dan kadar protein 18.95%. Enzim pepsin diisolasi dan dikarakterisasi dari lambung ikan tuna sirip kuning menggunakan bufer (10 mM tris-HCl pH 7.5 perbandingan 1:2. Rendemen ekstrak kasar yang diperoleh sebesar 64.5%, berwarna kecoklatan, aktivitas unit enzim sebesar 2.51±0.004 U/mg dan konsentrasi protein sebesar 0.506 mg/mL. Aktivitas enzim setelah presipitasi amonium sulfat menjadi 42.74±1.84 U/mg dan tahap dialisis menaikkan aktivitas spesifik enzim menjadi 51.37±0.22 U/mg. Pemurnian enzim dilanjutkan pada tahap kromatografi filtrasi gel menggunakan matriks Sephadex G-75 diperoleh aktivitas spesifik enzim yaitu 146.03±0.96 U/mg dengan kelipatan pemurnian sebesar 58.17 kali dan memiliki berat molekul sebesar 28.33 kDa. Enzim pepsin dari lambung ikan tuna sirip kuning memiliki nilai pH optimum yang stabil pada pH 2 hingga 3.5; suhu optimum stabil dari 20 hingga 60 oC dan aktivitas enzim pepsin dipengaruhi oleh ion logam Fe3+ dan Zn2+.